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异嗜性抗体阻断剂HBR常见问答

概要

人血清中的异嗜性抗体已被证实会导致免疫检验的假阳性或假阴性干扰。在免疫检验结合物中加入HBR能够消除异嗜性抗体的干扰。

Heterophilic Blocking ReagentFrequently Asked questions

异嗜性抗体阻断剂HBR常见问答

Q1:你需要HBR吗?

如果您符合以下描述,HBR值得您一试

  1. 正在研发来心法免疫试剂盒
  2. 遭遇过假阳性样本的困扰
  3. 需鉴别样本为真阳性还是假阳性
  4. 检测结果受到HAMA或异嗜性抗体干扰
  5. 需区分假阳性样本的干扰类别
  6. 需要一个通用阻断剂用于各种检测系统

Q2:什么是异嗜性抗体干扰?

病人血清/血浆中的内源性异惰性抗体,可结合其他种属的免疫球蛋白,包括作为免疫分析试剂的异源抗体,这些抗体会干扰免疫检验体系,造成与实际分析物浓度无关的虚高检测值,可能导致误诊。

异嗜性抗体可以影响各种检测,但对夹心法免疫检验影响最大。

Q3:异嗜性抗体干扰的原理?

夹心法免疫检测至少使用两种针对抗原不同表位的抗体,捕获抗体包被在固相,标记抗体游离在溶液中。正常情况下,样本中的抗原连接两种抗体,标记抗体结合到固相的量与样本中的抗原浓度成正比(图1)。

异嗜性抗体在抗原不存在的情况下,也可以桥连这两种抗体,使得结合到固相的标记抗体浓度升高(图2),造成假阳性结果。

Q4:HBR如何超越传统的阻断方法?

传统的被动阻断法,使用非特异性物质(鼠lgG,鼠血清,非特异性的单克隆抗体,聚合IgG等),阻断人类异嗜性抗体的结合。所有方法的阻断效果皆依赖人类异嗜性抗体的亲合力。通常人类异嗜性抗体的亲合力K值在10 5-10°范围内。HBR以完全不同的方法来实现阻断。HBR能特异性结合人类异嗜性抗体,产生位阻效应,阻止干扰。HBR特异性结合物的亲合力K值约109。

HBR的特异性,加上千倍于传统方法的亲合力,使得HBR具有以下优点,超越传统阻断方法:

  1. 使用HBR,只需少量蛋白质作封闭,不减弱检测信号。
  2. HBR比传统方法能阻断更多假阳性。
  3. HBR可阻断抗所有种属(anti-rabbit,anti-goat,an-sheep&anti-mouse)的反应.
  4. HBR可阻断抗鼠单克隆抗体的所有亚型(如anti-mouse IgG1,anti-mouse lgG2等)
  5. 使用HBR,不限定于某些检测。可作为通用试剂使用。

Q5:异嗜性干扰的普遍性?

  1. 现在已知干扰因素是免疫球蛋白,目前已发现IgG和lgM异嗜性抗体。
  2. 异嗜性干扰发生率很高。依病人人口而别,有高达40%发生率的报道。至少有10%的案例有据可考。
  3. 不同样本的干扰程度不同,同一病人样本的干扰程度也会随时间而变化。
  4. 异嗜性抗体并非针对特定种属,可与多种动物抗体结合。
  5. 异嗜性抗体并非单一和特异的实体,而是一个多成分的现象,包含多种可造成干扰的抗体,因此干扰并不限于基于单抗的检测体系。
  6. 干扰可能由所用抗体的Fc片段介导。EIA似乎较RIA更易受到干扰。

Q6:异嗜性抗体从何而来?

有许多可诱发病人体内产生异嗜性抗体的因素!其中包括:

  1. 动物接触(驯兽师,兽医)
  2. 动物产品接触(烹饪)
  3. 注射疫苗
  4. 输血
  5. 自身免疫性疾病
  6. 透析
  7. 母婴传递类
  8. 风湿因子也可产生异嗜性抗体效果
  9. 动物辅助治疗(胸腺细胞、羊细胞、胚胎细胞)
  10. 特定食物(奶酪)
  11. 心肌病变
  12. 秘方药物
  13. 肠胃炎(E,Coli)

Q7:异嗜性抗体和融融的区别?

异端性抗体是一个通称,用于描述能够结合动物抗体从而干扰免疫分析的所有人源抗体。

HAMA是异嗜性抗体中的一种,结合鼠源抗体。

Q8:怎样确认异嗜性干扰

1,将样本倍数稀释后再检测,若测值呈非线性,说明存在干扰物

2,同一样本采用不同检测方法,若结果大相径庭说明存在干扰物。

3,同一样本添加阻断剂与未添加阻断剂的检测结果不一致,说明存在干扰物。

4,用亲和色谱法去除样本中的目标分析物,再常规检测,若检测信号未消失,说明存在干扰物。


Q9:什么是阻断剂?

阻断剂是一种生物制剂,加入免疫检验体系中,可结合异嗜性抗体,从而有效防止非分析物介导的抗体相连。

目前有两种主要的阻断剂:

HAMA类阻断剂(Human Anti--Mouse Antibodies)

1,HAMA类阻断剂只阻断一种人抗特定动物抗体的活性(如人类抗鼠抗体),通常为非针对目标分析物的正常血清、正常IgG、单克隆抗体等。

2,这类“被动阻断剂”被过量地加入样本中,使得样本卟!的种属特异性抗体优先于低浓度的分析物与之结合。

3,这类试剂用途有限,因为仅能排除异嗜性干扰的一部分,而异嗜性干扰涉及许多成分。人们经常发现,IgG在一个双单抗夹心法检测体系中,只能纠正部分界嗜性干扰。

真正的异嗜性抗体阻断剂(HBR)

1,这种抑制剂可排除各种异嗜性干扰

2,内含“主动阻断剂”,对造成干扰的异嗜性抗体具特异性结合力

3,只需低浓度即可高效阻断,将影响减到最低。


Q10:理想的异嗜性抗体阻断剂的特点

1,必须能够纠正任何样本中的干扰,不管干扰是种属特异性抗体还是类风湿因子造成的。

2,必须是低浓度、高效能的,不会产生剂量一反应曲线

3,不应影响真阳性样本的稀释线性

4,必须有很好的重复性,无批间差

5,必须长期稳定

6,必须经济实用

7,必须简便易用,可直接添加到免疫试剂中,无需额外试剂或样本处理步骤

Q11:Scantibodles的HBR的特性?

Scantibodies HBR是专为对抗免疫检测中邦嗜性干扰问题设计的卓越产品,是用来特异性中和异嗜性抗体的具有独特结构的免疫球蛋白。纯度高于95%。

不同于其他厂家供应的非特异性“被动阻断剂”(过量使用以确保优先于分析物结合异端性抗体),Scantibodies HBR是靶向针对异嗜性抗体的“主动阻断剂”,有效中和其干扰。

可阻断的假阳性类型包括:

a人抗鼠抗体(HAMA)

b人抗山羊抗体

c人抗绵羊抗体

d人抗兔抗体

e类风湿因子

广泛特异性使得Scantibodies HBR可作为“通用试剂”,在各种常见的双抗体试剂盒中均可使用。

Scantibodies HBR为高特异性高纯度的试剂,极低浓度即够使用(只需正常小鼠IgG用量的百分之或千分之一),对检测信号无不良影响。

Scantibodies HBR不干扰人血清中分析物的加入或还原。

Scantibodies HBR不干扰真正阳性病人样本的稀释线性。

Scantibodies HBR批间重复性高。

Scantibodies HBR效期五年,品质稳定。

Scantibodies HBR的使用成本低于鼠IgG或鼠血清。

Scantibodies HBR可直接加入到检测缓冲液或结合液等。

Scantibodies的HBR是高纯度的IgG制剂,以液体形式供应,不含防腐剂。产品附以下说明,纯化方法、纯度(SDS-P船E)、缓冲液组分、保存条件、效期、外观等。

HBR使用步骤:

解冻HBR后轻轻倒置摇匀(不要产生气泡)将HBR直接加入结合液,使最终每如管中的HBR为40ug.

以3KC533 HBR-I(20mg/ml)为例:

A.解冻HBR,加2ml(即40mg)到25ml结合液中。

B.用稀释缓冲液将上述HBR结合液补足到100ml.

C.混匀,现每100uL准备液中含40ulHBR.向每孔管中加入准备液100uL.

D.继续实验的其他步骤、此为建议的HBR起始浓度,客户需根据其检验类型和样本的异嗜性干扰情况进行优化。

局限性

1使用HBR后所得的实验结果应结合医师的其他数据(症状、其他化验结果、临床反应等)使用。

2,在某些异嗜性干扰特别强的样本中,HBR可能不能完全阻断干扰。

性能特点

典型CA125检验中的异嗜性干扰:

产品:CA125检侧试剂盒

平行操作CA125和经HBR处理的CA125检验。

样本总数=585

检测到的阳性样本中:54例确认为假阳性(线性稀释法),其中46例经HBR处理后可纠正,9例经HBR处理后,用线性稀释法裣羽仍表现为非线性结果。

因此,[(9/46×54)+585]×100%=1.8%

未受HBR影响。

主要制造商的CEA产品裣验中的异嗜性干扰:

产品:CEA检测试剂盒

平行操作CEA和经HBR处理的CEA检测。

样本总数=96,检测到的阳性样本中:,89例确认为假阳性(线性稀释法),其中74例经HBR处理后结果呈线性,5例经HBR处理后,线性稀释法测定仍表现为非线性结果。

因此,[(5/74*89)/396]*100%=1.5%

未受HBR影响

商品信息:为试剂盒研发推荐

货号 品名
3KG775 Assay Development Blocking Kit

商品信息_为试剂盒生产厂商推荐

货号 品名
3KC533 Heterophilic Blocking Reagent (HBR), 20 mg/ml
3KC534-075 Heterophilic Blocking Reagent (HBR), 2mg/ml
3KC534 Heterophilic Blocking Reagent 1 (HBR 1), 2mg/ml
3BX484 HBR-1 , Non Purified
3KC535
HBR-2 , Purified
3KC701
HBR-3 , Purified
3KC542
HBR-6 , Purified
3KC564 HBR-9 , Purified
3KC565 HBR-11 , Purified
3KC545 HBR-Plus , Purified
商品信息_被动阻断剂

货号 品名
3BM245
Mouse lgG, Purified
3BM845
Mouse lgG, Purified, Concentrated