异嗜性抗体阻断剂HBR常见问答

Heterophilic Blocking ReagentFrequently Asked questions

异嗜性抗体阻断剂HBR常见问答

Q1:你需要HBR吗?

如果您符合以下描述，HBR值得您一试

1. 正在研发来心法免疫试剂盒
2. 遭遇过假阳性样本的困扰
3. 需鉴别样本为真阳性还是假阳性
4. 检测结果受到HAMA或异嗜性抗体干扰
5. 需区分假阳性样本的干扰类别
6. 需要一个通用阻断剂用于各种检测系统

Q2:什么是异嗜性抗体干扰?

病人血清/血浆中的内源性异惰性抗体，可结合其他种属的免疫球蛋白，包括作为免疫分析试剂的异源抗体，这些抗体会干扰免疫检验体系，造成与实际分析物浓度无关的虚高检测值，可能导致误诊。

异嗜性抗体可以影响各种检测，但对夹心法免疫检验影响最大。

Q3:异嗜性抗体干扰的原理?

夹心法免疫检测至少使用两种针对抗原不同表位的抗体，捕获抗体包被在固相，标记抗体游离在溶液中。正常情况下，样本中的抗原连接两种抗体，标记抗体结合到固相的量与样本中的抗原浓度成正比(图1)。

异嗜性抗体在抗原不存在的情况下，也可以桥连这两种抗体，使得结合到固相的标记抗体浓度升高(图2)，造成假阳性结果。

Q4：HBR如何超越传统的阻断方法?

传统的被动阻断法，使用非特异性物质(鼠lgG,鼠血清，非特异性的单克隆抗体，聚合IgG等)，阻断人类异嗜性抗体的结合。所有方法的阻断效果皆依赖人类异嗜性抗体的亲合力。通常人类异嗜性抗体的亲合力K值在10 5-10°范围内。HBR以完全不同的方法来实现阻断。HBR能特异性结合人类异嗜性抗体，产生位阻效应，阻止干扰。HBR特异性结合物的亲合力K值约109。

HBR的特异性，加上千倍于传统方法的亲合力，使得HBR具有以下优点，超越传统阻断方法:

1. 使用HBR,只需少量蛋白质作封闭，不减弱检测信号。
2. HBR比传统方法能阻断更多假阳性。
3. HBR可阻断抗所有种属(anti-rabbit,anti-goat,an-sheep&anti-mouse)的反应.
4. HBR可阻断抗鼠单克隆抗体的所有亚型(如anti-mouse IgG1,anti-mouse lgG2等)
5. 使用HBR，不限定于某些检测。可作为通用试剂使用。

Q5:异嗜性干扰的普遍性?

1. 现在已知干扰因素是免疫球蛋白，目前已发现IgG和lgM异嗜性抗体。
2. 异嗜性干扰发生率很高。依病人人口而别，有高达40%发生率的报道。至少有10%的案例有据可考。
3. 不同样本的干扰程度不同，同一病人样本的干扰程度也会随时间而变化。
4. 异嗜性抗体并非针对特定种属，可与多种动物抗体结合。
5. 异嗜性抗体并非单一和特异的实体，而是一个多成分的现象，包含多种可造成干扰的抗体，因此干扰并不限于基于单抗的检测体系。
6. 干扰可能由所用抗体的Fc片段介导。EIA似乎较RIA更易受到干扰。

Q6:异嗜性抗体从何而来?

有许多可诱发病人体内产生异嗜性抗体的因素!其中包括:

1. 动物接触(驯兽师，兽医)
2. 动物产品接触(烹饪)
3. 注射疫苗
4. 输血
5. 自身免疫性疾病
6. 透析
7. 母婴传递类
8. 风湿因子也可产生异嗜性抗体效果
9. 动物辅助治疗(胸腺细胞、羊细胞、胚胎细胞)
10. 特定食物(奶酪)
11. 心肌病变
12. 秘方药物
13. 肠胃炎(E,Coli)

Q7:异嗜性抗体和融融的区别?

异端性抗体是一个通称，用于描述能够结合动物抗体从而干扰免疫分析的所有人源抗体。

HAMA是异嗜性抗体中的一种，结合鼠源抗体。

Q8:怎样确认异嗜性干扰

1，将样本倍数稀释后再检测，若测值呈非线性，说明存在干扰物

2，同一样本采用不同检测方法，若结果大相径庭说明存在干扰物。

3，同一样本添加阻断剂与未添加阻断剂的检测结果不一致，说明存在干扰物。

4，用亲和色谱法去除样本中的目标分析物，再常规检测，若检测信号未消失，说明存在干扰物。

Q9:什么是阻断剂?

阻断剂是一种生物制剂，加入免疫检验体系中，可结合异嗜性抗体，从而有效防止非分析物介导的抗体相连。

目前有两种主要的阻断剂：

HAMA类阻断剂(Human Anti--Mouse Antibodies)

1，HAMA类阻断剂只阻断一种人抗特定动物抗体的活性(如人类抗鼠抗体)，通常为非针对目标分析物的正常血清、正常IgG、单克隆抗体等。

2，这类“被动阻断剂”被过量地加入样本中，使得样本卟!的种属特异性抗体优先于低浓度的分析物与之结合。

3，这类试剂用途有限，因为仅能排除异嗜性干扰的一部分，而异嗜性干扰涉及许多成分。人们经常发现，IgG在一个双单抗夹心法检测体系中，只能纠正部分界嗜性干扰。

真正的异嗜性抗体阻断剂(HBR)

1，这种抑制剂可排除各种异嗜性干扰

2，内含“主动阻断剂”，对造成干扰的异嗜性抗体具特异性结合力

3，只需低浓度即可高效阻断，将影响减到最低。

Q10:理想的异嗜性抗体阻断剂的特点

1，必须能够纠正任何样本中的干扰，不管干扰是种属特异性抗体还是类风湿因子造成的。

2，必须是低浓度、高效能的，不会产生剂量一反应曲线

3，不应影响真阳性样本的稀释线性

4，必须有很好的重复性，无批间差

5，必须长期稳定

6，必须经济实用

7，必须简便易用，可直接添加到免疫试剂中，无需额外试剂或样本处理步骤

Q11:Scantibodles的HBR的特性?

Scantibodies HBR是专为对抗免疫检测中邦嗜性干扰问题设计的卓越产品，是用来特异性中和异嗜性抗体的具有独特结构的免疫球蛋白。纯度高于95%。

不同于其他厂家供应的非特异性“被动阻断剂”(过量使用以确保优先于分析物结合异端性抗体)，Scantibodies HBR是靶向针对异嗜性抗体的“主动阻断剂”，有效中和其干扰。

可阻断的假阳性类型包括：

a人抗鼠抗体(HAMA)

b人抗山羊抗体

c人抗绵羊抗体

d人抗兔抗体

e类风湿因子

广泛特异性使得Scantibodies HBR可作为“通用试剂”,在各种常见的双抗体试剂盒中均可使用。

Scantibodies HBR为高特异性高纯度的试剂，极低浓度即够使用(只需正常小鼠IgG用量的百分之或千分之一)，对检测信号无不良影响。

Scantibodies HBR不干扰人血清中分析物的加入或还原。

Scantibodies HBR不干扰真正阳性病人样本的稀释线性。

Scantibodies HBR批间重复性高。

Scantibodies HBR效期五年，品质稳定。

Scantibodies HBR的使用成本低于鼠IgG或鼠血清。

Scantibodies HBR可直接加入到检测缓冲液或结合液等。

Scantibodies的HBR是高纯度的IgG制剂，以液体形式供应，不含防腐剂。产品附以下说明，纯化方法、纯度(SDS-P船E)、缓冲液组分、保存条件、效期、外观等。

HBR使用步骤:

解冻HBR后轻轻倒置摇匀(不要产生气泡)将HBR直接加入结合液，使最终每如管中的HBR为40ug.

以3KC533 HBR-I(20mg/ml)为例：

A.解冻HBR，加2ml(即40mg)到25ml结合液中。

B.用稀释缓冲液将上述HBR结合液补足到100ml.

C.混匀，现每100uL准备液中含40ulHBR.向每孔管中加入准备液100uL.

D.继续实验的其他步骤、此为建议的HBR起始浓度，客户需根据其检验类型和样本的异嗜性干扰情况进行优化。

局限性

1使用HBR后所得的实验结果应结合医师的其他数据(症状、其他化验结果、临床反应等)使用。

2,在某些异嗜性干扰特别强的样本中，HBR可能不能完全阻断干扰。

性能特点

典型CA125检验中的异嗜性干扰：

产品：CA125检侧试剂盒

平行操作CA125和经HBR处理的CA125检验。

样本总数=585

检测到的阳性样本中：54例确认为假阳性(线性稀释法)，其中46例经HBR处理后可纠正，9例经HBR处理后，用线性稀释法裣羽仍表现为非线性结果。

因此，[(9/46×54)+585]×100%=1.8%

未受HBR影响。

主要制造商的CEA产品裣验中的异嗜性干扰：

产品：CEA检测试剂盒

平行操作CEA和经HBR处理的CEA检测。

样本总数=96，检测到的阳性样本中：，89例确认为假阳性（线性稀释法），其中74例经HBR处理后结果呈线性，5例经HBR处理后，线性稀释法测定仍表现为非线性结果。

因此，[（5/74*89）/396]*100％=1.5％

未受HBR影响

商品信息：为试剂盒研发推荐

商品信息_为试剂盒生产厂商推荐