干扰消除是免疫检测试剂盒研发中的一项重要任务：检测系统的灵敏度增加，更高的精密度和最方便的操作均需要高效的干扰消除。同时，为保证质量还会有其他更严格的要求。罗氏公司提供的干扰消除产品能够完美地满足这一需求。
步骤1：消除非特异性干扰
使用单体试剂
使用多聚体试剂
步骤2：消除特异性干扰(HAMAs)——按检测类别分类
从基本型的IEP(a)开始，然后根据实际情况可选用(b)，进而选用(c)。
MAK33 IgG1
MAK33 IgG1/IgG1 Poly
MAK33 Framework
MAK33 IgG1
MAK33 IgG1/Fab1 Poly
MAK33 Framework
步骤1用于去除非特异性干扰。非特异性干扰是产生高背景信号的主要原因，同时也是其它或多或少不确定的干扰来源。步骤2用于消除特异性HAMA干扰，该干扰可引起显著的假阳性或假阴性信号。
非特异性干扰是指固相和检测成分之间所有多余的结合。特异性干扰则是指针对于标记酶，检测抗体之间的干扰（HAMA干扰）1)。
另一个重要概念是单价和多价干扰之间的区别。根据具体的检测形式，基本型的单价IEP（干扰消除蛋白）便足够以消扰干扰的效应。但是如果出现多价干扰的影响，干扰的消除则变得更为复杂，并需要多价的干扰消除产品。
非特异性干扰
罗氏提供的干扰消除方案适用于几乎全部的常见干扰类型。
步骤1：满足消除非特异性干扰引起的背景问题的需要
步骤2：对于人抗小鼠抗体干扰，可针对不同的检测种类提供高度特异的个性化解决方案
消除检测干扰的第1步是除去所有非特异性的干扰。阻断检测组分与固相的非特异性链接，从而降低背景信号并改善检测的灵敏度和动力学。
罗氏提供三组非特异性IEPs。根据检测的性能要求，这些IEPs可单独使用或组合使用
■ 适用于所有检测的基本型产品，
■ 适用于更复杂检测的高级产品，
■ 适用于低背景甚至感染性疾病检测的高级多价产品。
另外，全部非特异性IEPs均可用作保护性和稳定性蛋白，并且是稀释剂和人工血清的基本成分。
灵活的产品组合能够确保消除非特异性干扰引起的背景问题。
特异性干扰：人抗小鼠抗体（HAMAs）
特异性干扰主要由嗜异性抗体（人抗动物抗体）引起，能够导致明显的假阳性或假阴性结果。据报道，特异性干扰可发生在30-40％的患者样本中9)。这些嗜异性抗体可以是IgAs、IgEs、IgGs、IgMs或Ig(n)。它们可能是多聚体或单体并且浓度范围很广。但是，它们均直接针对检测系统的特异性抗体。
罗氏IEP的研发是基于尽可能特异高效地消除相应干扰的理念。为此，我们提供了2种不同的解决方案：
1.自发性HAMAs和免疫获得性HAMAs
自发性HAMAs主要在高HAMA滴度人群中发现，原因尚无合理的解释。这些HAMAs大部分特异性较弱并且是多价。免疫获得性HAMAs主要是由于单克隆抗体治疗引起的。通常产生的HAMAs具有特异性和单/双价。
2. 攻击位点
检测的设计对干扰的消除有着显著影响。IgG1检测需要消除IgG1的干扰，正如IgG2a检测需要消除IgG2a的干扰。同样，抗体的片段也很重要。如果涉及Fab片段，那么Fab片段也应成为干扰消除的一部分。此外，在高度灵敏的检测中，也必须考虑到特异性骨架区域。
见zk-2图：
阳性质控：HAMA血清1型和2L型
为保证快速有效地消除HAMA干扰效应并获得可靠的结果，罗氏提供两种可重复性HAMA干扰质控血清。
该血清可用于研发和质控。这两种血清可产生极强的干扰，因此用于每日常规分析时可稀释达20倍。
HAMA血清 1型SQ：多价自发型HAMAs。
HAMA血清 2L型SQ：单/双价免疫反应产生的HAMAs。
基于不同患者的免疫系统两种类型的干扰（自发型HAMAs和免疫获得型HAMAs）的差异可能非常大。
见ZK1图：
实验对比数据：检测原理
为了清楚地说明罗氏干扰消除蛋白不同于其他干扰消除蛋白的特性以及与同类产品进行比较，罗氏引用了一种竞争性检测模式。
该检测模式基于两种不同的IgG1抗体，它们仅在样本（A）中存在干扰时产生信号。通过添加干扰消除蛋白，可以阻断该干扰并妨碍夹心复合物的构建。如果干扰消除的效率越高，那么检测中的信号就越弱（B）。
见ZK2图：
两份混合血清主要代表具有强烈单体干扰的患者样本的混合物，因为它是通过免疫治疗引起的，因此两份混合血清都可用于和HAMA血清2的比较。
所有的天然HAMA血清在常规测定中均产生无法解释的结果。全部数据在罗氏诊断Elecsys2010系统上获得。
实验对比数据：HAMA滴度与干扰强度的相关性
基于前述检测原理，实验的第一步是比较23份天然血清中干扰信号的强度和HAMA滴度（Medac）的关系。
数据点阵清楚地表明在HAMA滴度和干扰强度之间缺乏相关性，因此必需
要考虑到干扰的类型。
实验对比数据：各种IEP的效应
接下来的实验是研究不同的干扰类型和各种IEPs对它们的影响。在不同的IEPs水平，对HAMA质控血清I，II和两种混合天然血清进行比较。全部4份血清均产生极其强烈的HAMA干扰。以下数据是在无IEP，添加一种同类产品和添加4种罗氏IEP（浓度范围为10-500μg/ml）条件下分别获得。结果显示浓度范围在75-200μg/ml的IEP有较好的性价比。正常血清的cut-off值设置为1000RU。
这些实验清楚地表明干扰类型和相应的干扰消除之间有很高的相关性。
实验对比数据：单个血清的检测结果
为了说明各种IEPs在实验室日常工作中应用的效应，最后一步实验是检测23种天然干扰血清。
检测了一种同类IEP和三种罗氏的IEP。除了检测各种单一试剂外还检测了两种罗氏IEP的混合物。IEP的浓度均为100 μg/ml。在该浓度下即使不能完全消除HAMAs干扰，也足以对IEPs的不同功能有个全面的概览。
■ 无IEP
■ MAK33 IgG1/IgG1 Poly
■ MAK33 IgG1
■ MAK33 Framework IEP
■ MAK33 IgG1/IgG1 Poly+MAK33
IgG1 (50+50)
■ MAK33 IgG1/IgG1 Poly+MAK33
Framework IEP (50+50)
■ 同类产品
第一个最重要的检测结果是：几乎没有任意2个HAMA血清的检测结果是一样的，但可以分成5个小组。
各种IEP组合在多种检测中的应用
MAK33 IgG1/Fab1聚合物的效应
由于竞争性检测模式中不包括针对Fab表位的干扰，因此特以下述例子来验证MAK33IgG1/Fab1聚合物的优势。采用常规CEA IgG1-Fab1 MTP检测系统，比较MAK33 IgG1、MAK33 IgG1/IgG1聚合物和MAK33 IgG1/Fab1聚合物的干扰消除强度。检测样本为具有多价干扰代表性的HAMA血清I。干扰消除蛋白在CEA检测缓冲液中的浓度为6.25－400μg/ml。
IEP浓度是按照100μg/ml缓冲液的抗体浓度估算的。全部数据和实验均基于Elecsys检测系统。不同检测形式和不同仪器之间的结果可能有差异。实际应用的IEP混合物需根据实验需求进行优化。
非特异性干扰消除产品参数：牛血清白蛋白、牛IgG
羊IgG、BPLA和Poly BSA
特异性干扰消除产品参数：MAK33家族