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常说的HAMA效应,是怎么一回事?

免疫检测试剂中使用的抗体包括单克隆抗体与多克隆抗体,其中单克隆抗体常由杂交瘤细胞系生产得到,鼠源单抗应用广泛。多克隆抗体通常来自于经免疫后的哺乳动物的血液和胸腹水。


免疫检测以抗原抗体的特异性结合为原理,对标本中的已知物质进行检测。免疫检测可能会受到标本中一些物质的干扰,如药物、类风湿因子、非特异性抗体等。其中,标本中的抗动物抗体是一类常见的干扰因素,这一类抗体会与鼠或其他动物来源的检测试剂组份发生抗原抗体反应,影响检测结果。


抗动物抗体对免疫检测结果产生的干扰,多数情况下是导至假阳性结果(或结果偏高),但偶尔也会导至假阴性结果(或结果偏低)的出现。以夹心法为例,假阳性结果的出现是抗动物抗体将动物来源的捕获抗体和标记抗体桥接到一起,在没有待测抗原的情况下,也出现阳性结果,如图1b所示。假阴性结果则是由于高浓度的抗动物抗体分别与捕获抗体与标记抗体结合,导至待测抗原无法结合,标记抗体在洗涤过程中被洗去,无法产生信号,如图1c所示。



动物来源的临床和实验用药物组份

a. 真阳性结果   b. 假阳性结果   c. 假阴性结果

免疫检测竞争法测定中也存在抗动物抗体的干扰,但与夹心法检测干扰相比较弱。


循环抗动物抗体的出现通常是由于免疫系统遇到“外来的”抗原或蛋白(如鼠单抗IgG)的常规反应。越来越多的治疗和诊断药物来源于动物性抗原或利用动物来源的单克隆抗体进行亲和纯化的蛋白,其制备与纯化过程中,有此类蛋白存在。一些非常规的治疗,如服用补品等,同样可能包括有抗原性的动物蛋白。预防传染病的疫苗及接受血制品同样可能导至该问题。事实上,某些疫苗中含有来自鸡蛋培养基、兔血清或鸡胚胎的蛋白。尽管流感疫苗在病毒抗体检测假阳性结果中的作用尚存在疑问。表1列出了一些为治疗或诊断过程中使用的含有动物或重组来源的抗原性蛋白。同时,也有一些非医源性的原因会导至人体内含有抗动物抗体,包括饲养宠物、从事畜牧业,胎儿可能通过胎盘接触抗原,甚至进食中动物来源的抗原会通过消化道进入体内。


动物来源的临床和实验用药物组份

人抗鼠抗体(HAMAs)是抗动物抗体中为免疫检测带来最多麻烦一种,也是迄今为止最受关注的抗动物抗体,这与单克隆抗体药物的广泛使用有关。


单克隆抗体是一类结构均一、可重复大量生产的高纯度抗体,因其特异性强,作为药物靶向性好,正越来越多的被应用于临床。鼠源性及人-鼠嵌合抗体制备较为简便,早期药品中应用广泛,但由于其鼠源部分结构有免疫原性,易导至用药患者体内产生针对这一部分的抗体,即人抗鼠抗体。表2列举了部分单克隆抗体及其适应症。

治疗用单克隆抗体


HAMAs是一种抗抗体,包括IgG、IgM、IgA,也有少量IgE,有独特型抗体、同种型抗体和抗-抗独特性抗体的区别。通常,独特型抗体比同种型抗体更为常见。不同HAMAs导至的HAMA效应也有一定区别。独特型抗体可与免疫球蛋白的Fab段结合,同种型抗体与免疫球蛋白的Fc段结合为主,也可与Fab段结合,如下图所示。有数据表明,80%的HAMAs为抗独特型抗体。

 IgG型HAMAs结构、抗原结合位点示意图


HAMA在人体内存在的量和时间因不同个体存在很大差异:血清中的含量由μg/L到g/L不等,存在时间由数周至数月不等,如再次暴露,有记忆B细胞存在的活性抗体表达可维持数年。


HAMAs产生干扰的主要特点如下:


1. 人体内HAMAs滴度不定,亲和力也不定,故干扰强度存在个体差异;

2. HAMAs本身为蛋白质,可能成为自身抗原,产生抗抗体,从而形成网络反应体系;

3. 有些HAMAs不识别抗原也不是别抗体,但识别抗原抗体复合物,产生干扰;

4. 由于干扰抗体的存在,原本的抗原抗体结合的动态平衡被打破,对检测产生影响。


对HAMA效应的发现途径主要包括:


临床:医生对患者的动物源性暴露史的询问,包括动物饲养等密切接触史、职业史,血制品及单抗靶向药物应用等,并如实告知检验科;


实验室人员:在确定仪器、试剂正常情况下,如发现检测结果与实际表现、治疗史及病史不符的情况,应考虑HAMA效应。


随着越来越多的单抗药物在临床使用,HAMA效应的发生逐渐增多。对此,免疫诊断试剂生产商也不断对产品进行优化,通过添加阻断剂等方法,尽可能避免干扰的发生。