Heterophilic Blocking ReagentFrequently Asked questions
异嗜性抗体阻断剂HBR常见问答
Q1:你需要HBR吗?
如果您符合以下描述,HBR值得您一试
- 正在研发来心法免疫试剂盒
- 遭遇过假阳性样本的困扰
- 需鉴别样本为真阳性还是假阳性
- 检测结果受到HAMA或异嗜性抗体干扰
- 需区分假阳性样本的干扰类别
- 需要一个通用阻断剂用于各种检测系统
Q2:什么是异嗜性抗体干扰?
病人血清/血浆中的内源性异惰性抗体,可结合其他种属的免疫球蛋白,包括作为免疫分析试剂的异源抗体,这些抗体会干扰免疫检验体系,造成与实际分析物浓度无关的虚高检测值,可能导致误诊。
异嗜性抗体可以影响各种检测,但对夹心法免疫检验影响最大。
Q3:异嗜性抗体干扰的原理?
夹心法免疫检测至少使用两种针对抗原不同表位的抗体,捕获抗体包被在固相,标记抗体游离在溶液中。正常情况下,样本中的抗原连接两种抗体,标记抗体结合到固相的量与样本中的抗原浓度成正比(图1)。
异嗜性抗体在抗原不存在的情况下,也可以桥连这两种抗体,使得结合到固相的标记抗体浓度升高(图2),造成假阳性结果。
Q4:HBR如何超越传统的阻断方法?
传统的被动阻断法,使用非特异性物质(鼠lgG,鼠血清,非特异性的单克隆抗体,聚合IgG等),阻断人类异嗜性抗体的结合。所有方法的阻断效果皆依赖人类异嗜性抗体的亲合力。通常人类异嗜性抗体的亲合力K值在10 5-10°范围内。HBR以完全不同的方法来实现阻断。HBR能特异性结合人类异嗜性抗体,产生位阻效应,阻止干扰。HBR特异性结合物的亲合力K值约109。
HBR的特异性,加上千倍于传统方法的亲合力,使得HBR具有以下优点,超越传统阻断方法:
- 使用HBR,只需少量蛋白质作封闭,不减弱检测信号。
- HBR比传统方法能阻断更多假阳性。
- HBR可阻断抗所有种属(anti-rabbit,anti-goat,an-sheep&anti-mouse)的反应.
- HBR可阻断抗鼠单克隆抗体的所有亚型(如anti-mouse IgG1,anti-mouse lgG2等)
- 使用HBR,不限定于某些检测。可作为通用试剂使用。
Q5:异嗜性干扰的普遍性?
- 现在已知干扰因素是免疫球蛋白,目前已发现IgG和lgM异嗜性抗体。
- 异嗜性干扰发生率很高。依病人人口而别,有高达40%发生率的报道。至少有10%的案例有据可考。
- 不同样本的干扰程度不同,同一病人样本的干扰程度也会随时间而变化。
- 异嗜性抗体并非针对特定种属,可与多种动物抗体结合。
- 异嗜性抗体并非单一和特异的实体,而是一个多成分的现象,包含多种可造成干扰的抗体,因此干扰并不限于基于单抗的检测体系。
- 干扰可能由所用抗体的Fc片段介导。EIA似乎较RIA更易受到干扰。
Q6:异嗜性抗体从何而来?
有许多可诱发病人体内产生异嗜性抗体的因素!其中包括:
- 动物接触(驯兽师,兽医)
- 动物产品接触(烹饪)
- 注射疫苗
- 输血
- 自身免疫性疾病
- 透析
- 母婴传递类
- 风湿因子也可产生异嗜性抗体效果
- 动物辅助治疗(胸腺细胞、羊细胞、胚胎细胞)
- 特定食物(奶酪)
- 心肌病变
- 秘方药物
- 肠胃炎(E,Coli)
Q7:异嗜性抗体和融融的区别?
异端性抗体是一个通称,用于描述能够结合动物抗体从而干扰免疫分析的所有人源抗体。
HAMA是异嗜性抗体中的一种,结合鼠源抗体。
Q8:怎样确认异嗜性干扰
1,将样本倍数稀释后再检测,若测值呈非线性,说明存在干扰物
2,同一样本采用不同检测方法,若结果大相径庭说明存在干扰物。
3,同一样本添加阻断剂与未添加阻断剂的检测结果不一致,说明存在干扰物。
4,用亲和色谱法去除样本中的目标分析物,再常规检测,若检测信号未消失,说明存在干扰物。
Q9:什么是阻断剂?
阻断剂是一种生物制剂,加入免疫检验体系中,可结合异嗜性抗体,从而有效防止非分析物介导的抗体相连。
目前有两种主要的阻断剂:
HAMA类阻断剂(Human Anti--Mouse Antibodies)
1,HAMA类阻断剂只阻断一种人抗特定动物抗体的活性(如人类抗鼠抗体),通常为非针对目标分析物的正常血清、正常IgG、单克隆抗体等。
2,这类“被动阻断剂”被过量地加入样本中,使得样本卟!的种属特异性抗体优先于低浓度的分析物与之结合。
3,这类试剂用途有限,因为仅能排除异嗜性干扰的一部分,而异嗜性干扰涉及许多成分。人们经常发现,IgG在一个双单抗夹心法检测体系中,只能纠正部分界嗜性干扰。
真正的异嗜性抗体阻断剂(HBR)
1,这种抑制剂可排除各种异嗜性干扰
2,内含“主动阻断剂”,对造成干扰的异嗜性抗体具特异性结合力
3,只需低浓度即可高效阻断,将影响减到最低。
Q10:理想的异嗜性抗体阻断剂的特点
1,必须能够纠正任何样本中的干扰,不管干扰是种属特异性抗体还是类风湿因子造成的。
2,必须是低浓度、高效能的,不会产生剂量一反应曲线
3,不应影响真阳性样本的稀释线性
4,必须有很好的重复性,无批间差
5,必须长期稳定
6,必须经济实用
7,必须简便易用,可直接添加到免疫试剂中,无需额外试剂或样本处理步骤
Q11:Scantibodles的HBR的特性?
Scantibodies HBR是专为对抗免疫检测中邦嗜性干扰问题设计的卓越产品,是用来特异性中和异嗜性抗体的具有独特结构的免疫球蛋白。纯度高于95%。
不同于其他厂家供应的非特异性“被动阻断剂”(过量使用以确保优先于分析物结合异端性抗体),Scantibodies HBR是靶向针对异嗜性抗体的“主动阻断剂”,有效中和其干扰。
可阻断的假阳性类型包括:
a人抗鼠抗体(HAMA)
b人抗山羊抗体
c人抗绵羊抗体
d人抗兔抗体
e类风湿因子
广泛特异性使得Scantibodies HBR可作为“通用试剂”,在各种常见的双抗体试剂盒中均可使用。
Scantibodies HBR为高特异性高纯度的试剂,极低浓度即够使用(只需正常小鼠IgG用量的百分之或千分之一),对检测信号无不良影响。
Scantibodies HBR不干扰人血清中分析物的加入或还原。
Scantibodies HBR不干扰真正阳性病人样本的稀释线性。
Scantibodies HBR批间重复性高。
Scantibodies HBR效期五年,品质稳定。
Scantibodies HBR的使用成本低于鼠IgG或鼠血清。
Scantibodies HBR可直接加入到检测缓冲液或结合液等。
Scantibodies的HBR是高纯度的IgG制剂,以液体形式供应,不含防腐剂。产品附以下说明,纯化方法、纯度(SDS-P船E)、缓冲液组分、保存条件、效期、外观等。
HBR使用步骤:
解冻HBR后轻轻倒置摇匀(不要产生气泡)将HBR直接加入结合液,使最终每如管中的HBR为40ug.
以3KC533 HBR-I(20mg/ml)为例:
A.解冻HBR,加2ml(即40mg)到25ml结合液中。
B.用稀释缓冲液将上述HBR结合液补足到100ml.
C.混匀,现每100uL准备液中含40ulHBR.向每孔管中加入准备液100uL.
D.继续实验的其他步骤、此为建议的HBR起始浓度,客户需根据其检验类型和样本的异嗜性干扰情况进行优化。
局限性
1使用HBR后所得的实验结果应结合医师的其他数据(症状、其他化验结果、临床反应等)使用。
2,在某些异嗜性干扰特别强的样本中,HBR可能不能完全阻断干扰。
性能特点
典型CA125检验中的异嗜性干扰:
产品:CA125检侧试剂盒
平行操作CA125和经HBR处理的CA125检验。
样本总数=585
检测到的阳性样本中:54例确认为假阳性(线性稀释法),其中46例经HBR处理后可纠正,9例经HBR处理后,用线性稀释法裣羽仍表现为非线性结果。
因此,[(9/46×54)+585]×100%=1.8%
未受HBR影响。
主要制造商的CEA产品裣验中的异嗜性干扰:
产品:CEA检测试剂盒
平行操作CEA和经HBR处理的CEA检测。
样本总数=96,检测到的阳性样本中:,89例确认为假阳性(线性稀释法),其中74例经HBR处理后结果呈线性,5例经HBR处理后,线性稀释法测定仍表现为非线性结果。
因此,[(5/74*89)/396]*100%=1.5%
未受HBR影响
商品信息:为试剂盒研发推荐
货号
品名
3KG775
Assay Development Blocking Kit
商品信息_为试剂盒生产厂商推荐
商品信息_被动阻断剂
货号
品名
3KC533
Heterophilic Blocking Reagent (HBR), 20 mg/ml
3KC534-075
Heterophilic Blocking Reagent (HBR), 2mg/ml
3KC534
Heterophilic Blocking Reagent 1 (HBR 1), 2mg/ml
3BX484
HBR-1 , Non Purified
3KC535
HBR-2 , Purified
3KC701
HBR-3 , Purified
3KC542
HBR-6 , Purified
3KC564
HBR-9 , Purified
3KC565
HBR-11 , Purified
3KC545
HBR-Plus , Purified
货号
品名
3BM245
Mouse lgG, Purified
3BM845
Mouse lgG, Purified, Concentrated